实验动物的处死与取材

一、实验动物的处死

实验动物的处死方法很多，应根据动物实验目的、实验动物品种（品系）、以及需要采集标本的部位等因素，选择不同的处死方法。无论采用哪一种方法，都应遵循安乐死的原则。安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间无痛苦地死亡。处死实验动物时应注意，首先要保证实验人员的安全；其次要确认实验动物已经死亡，通过对呼吸、心跳、瞳孔、神经反射等指征的观察，对死亡作出综合判断；再者要注意环保，避免污染环境，还要妥善处理好尸体。

1、颈椎脱臼处死法

此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

2、断头处死法

此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。

3、放血处死法

此法适用于各种实验动物。具体做法是将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。犬、猴等大动物应在轻度麻醉状态下，在股三角做横切口，将股动脉、股静脉全部暴露并切断，让血液流出。操作时用自来水不断冲洗切口及血液，既可保持血液畅流无阻，又可保持操作台清洁，使实验动物急性大出血死亡。

4、空气栓塞处死法

处死兔、猫、犬常用此法。向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。空气栓塞处死法注入的空气量，猫和兔为20~50ml，犬为90~160ml。

5、过量麻醉处死法

此法多用于处死豚鼠和家兔。快速过量注射非挥发性麻醉药（投药量为深麻醉时的30倍），或让动物吸入过量的乙醚，使实验动物中枢神经经过过度抑制，导致死亡。

二、病理取材基本要求

1、病理检查应分层次进行，先进行一般外观观察，后剖检观察，再进行光镜详细检查。

2、通常选择正常与病变交界处组织，即包括病变本身及病变周围组织。

3、对照组动物相同器官取材时，选材部位应尽量一致。

4、肉眼看不到的明显病变时，各试验组选取标本位置应一致。

5、所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构，如肾应包括皮质、髓质和肾盂。

6、体积大和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位，小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。

7、胃肠标本应将内容物冲洗掉，以免内容物影响组织固定，产生自溶。

8、所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性，不宜过厚或过薄，一般厚约3~5mm，大小为1.5~2平方厘米。

9、切取组织时不要挤压，使用锋利刀具，少用剪刀，勿选用被器械钳压过的部位。

10、标本取材要熟悉，尽可能快的完成整个过程，特别是易自溶的组织，如肠道、脑、腺体等。

11、剖检记录应客观、详细，用形象描述而不能用诊断的病名来代替。

12、同一实验中的对照组和实验组动物应交叉剖检，严格统一各种条件和操作，尽量避免各种可能的干扰因素。

三、病理剖检基本操作

(一) 常用器械及使用方法：

1、 解剖刀 主要用于切开和分割软组织，刀片宜用血管钳（可持针钳）夹持安装，避免割伤手指。

常用的持刀法有以下4种：执弓式、抓持式、执笔式、反挑式。

2、 手术剪 用于分离与剪开

3、 血管钳 用于分离和钳夹组织，钳夹缝合针和布巾等。

4、 手术镊 用于夹持组织，以利于解剖和缝合。

5、 拉钩 用于牵引和暴露

(二)基本操作：

1、切开：在同一平面上时，先绷紧组织，将刀刃与平面垂直，用力要得当，一次垂直切开，切口整齐而不偏斜，禁止斜切和锯切，以减少损伤。切开多层组织时，一般应按组织层次分层切开，避免损伤深层组织器官。

2、组织分离法：可用锐性分离法，使用刀、剪等锐性器械直接切割，如皮肤、黏膜、精细结构和紧密连结组织的分离；也可用钝性分离法，使用分柄、止血钳、剥离器，手指等分离，如肌肉，疏松结缔组织等的分离。

3、结扎：用丝线打结的方法扎组织和血管，参与缝合器官和皮肤。

4、止血：大量出血导致胸、腹部积血使剖检视野模糊不清，会影响和干扰病变的辨别和取材，因此动物剖检有时要求止血。

(1) 纱布块压迫止血法：剖检过程中，为观察病变性质和部位，辨清组织和神经、血管通路，以及对较广泛的毛细血管渗出，可用纱布按压施行短暂性的止血，但不可用纱布来回擦拭血液，以免损伤组织。

(2) 钳夹止血法：先用纱布块止血，看清出血点或血管后用止血钳的尖端垂直对准出血点，迅速而准确的钳夹并捻转，使血管闭塞而止血。

(3) 结扎止血法：用于动脉出血或较大的血管出血。

四、剖检取材程序

(一)实验动物尸体的固定

通常为仰卧位固定。

(二)剖检顺序

多为先腹腔后胸腔，再脑、脊髓、骨髓、皮肤肌肉等。取材顺序基本与此相同。

(三)检查内容

1、 位置：有无移位、异位

2、 大小：体积增大、缩小或肿大

3、 色泽： 整体或局部颜色的增减改变。

4、 附加物：有无出血、积液、粘连。

5、 质地：硬、韧、软等。

6、 切面：多汁、泡沫状、带血、脓汁、干燥等。

7、 中空器官的黏膜面有无出血、溃疡、增厚、隆起物等。

(四)剖检和取材程序

1、 腹腔和腹腔器官

沿腹部正中线切开剑突至肛门之间的腹前壁，再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。观察有无积液、血液和炎性渗出物，如有则用吸管吸出，测量容积并经离心沉淀涂片检查，必要时作细菌培养。检查粘膜是否光滑，有无充血、瘀血、出血、破裂、脓肿、粘连、肿瘤、寄生虫等，膈的紧张度及有无破裂。

(1)脾脏：检查大小、厚薄、硬度、性状、色泽、有否肥厚、破裂等。然后沿长轴将脾切成两半，切面要平整，检查脾小梁、红髓、滤泡的色泽，切面的出血量。

(2)胰腺：检查胰腺色泽和硬度，切面检查有无出血。

(3)胃肠：检查胃的大小、胃肠道浆膜面的色泽，有无粘连、肿瘤、寄生虫结节。然后沿胃大弯、肠系膜附着部依次剪开胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠。观察胃内有无异物，内容物的气味及性状，除去内容物，检查黏膜颜色，有无充血、出血、化脓。采用边剪开边观察的办法检查肠管，观察肠内容物数量、性状，有无气体、血液、异物、寄生虫，肠黏膜皱壁有无增厚、水肿、充血、粘液量、溃疡、坏死、淋巴组织性状及有无炎症。

(4)肾脏：首先检查肾脏大小、硬度、被膜是否容易剥离，肾表面的色泽、平滑度，有无疤痕、出血变化。然后检查切面皮质和髓质的色泽，有无瘀血、出血、化脓和梗死。注意观察皮质和髓质交界处的切面是否隆突，以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状，有无肿瘤及寄生虫等。

(5)肝脏：首先检查肝脏的大小、被膜的性状、边缘的厚薄、实质的硬度和色泽，以及肝淋巴结、血管、肝管等的性状。然后作切面，检查切面的出血量、色泽，肝小叶性状、有无脓肿、肝坏死等变化。

(6)肾上腺：观察外形、大小、色泽和硬度，作纵切和横切，检查皮质和髓质的色泽及有无出血。

2、 盆腔器官

(1)膀胱：检查膀胱的大小、尿量及色泽，黏膜有无出血、炎症和结石等。

(2)雄性生殖器官：检查睾丸、附睾、凝固腺、前列腺有无粘连、出血、水肿、积液等。

(3)雌性生殖器官：沿子宫体背侧剪开子宫角，检查子宫内膜的色泽、有无充血、出血、炎症等，观察卵巢和输卵管有无粘连、出血、水肿、积液等。

3、胸腔、口腔及其器官

用镊子夹住胸骨剑突，剪断膈肌与胸骨的连结，提起胸骨，在胸椎两侧分别剪断左、右侧胸壁的肋骨，取下整个胸壁，打开胸腔，依次取出胸腺和心脏。将下颌骨的两下颌支内侧与舌连结的肌肉切断，将咽、喉、气管、食道与周围组织分离，用镊子夹住气管向上提起，剪断肺与胸膜的连结韧带，然后将咽、喉、气管、食道连同整个肺脏一并取出。如有积液应观察其数量和性状，尽量吸取，测量容积并涂片，检查胸膜色泽，有无出血、充血或粘连。

(1)心脏：剪开心包膜，暴露心脏，注意心包的光泽度及心包内液体的情况，心脏的大小、外形、心外膜情况。自下腔静脉入口处至右心房作直线剖开，从此直线中点沿心脏右缘剖至心尖部， 从距离心尖部与心室间隔右侧 1cm 处平行地剖至肺动脉；检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否病变。自左右静脉入口处将左心房直线切开，沿心脏左缘剖至心尖部， 再从距离心尖部与心室间隔左侧1cm 处平行地剖开左心室的前壁和主动脉，检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变，左心房、左心室内壁有无出血和感染。自冠状动脉口起剪开前降支和旋支，在主动脉根部右侧，于右心室的心外膜找到右冠状动脉主干，先横切一刀，再剪至后降支；观察有无粥样硬化和血栓等。

(2)口腔：检查牙齿的变化，口腔黏膜的色泽、有无外伤、溃疡和白斑，舌黏膜有无出血、外伤及舌苔的情况。

(3)咽喉：观察喉头、会厌软骨黏膜的色泽、淋巴结的性状及喉囊有无积脓。

(4)鼻腔：检查鼻腔和鼻中隔黏膜的色泽、有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡穿孔及疤痕等。

(5)下颌及颈部淋巴结：检查下颌及颈部淋巴结的大小、硬度、有无出血和化脓等。

(6)气管：检查气管有无出血、黏液量等。

(7)肺脏：检查肺的色泽、有无出血、炎症、肺气肿、肺萎缩、肿瘤等。

(8)其他器官：胸腺，甲状腺，扁桃体等的色泽、有无粘连、出血、水肿等。

四、脏器测量和称重

1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。

2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止 器官干燥失水而重量减轻。

3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。